A repetitive probe for FISH analysis of bovine interphase nucleiReport as inadecuate




A repetitive probe for FISH analysis of bovine interphase nuclei - Download this document for free, or read online. Document in PDF available to download.



Abstract : The purpose of this study was to generate repetitive DNA sequence probes for the analysis of interphase nuclei by fluorescent in situ hybridisation FISH. Such probes are useful for the diagnosis of chromosomal abnormalities in bovine preimplanted embryos. Of the seven probes E1A, E4A, Ba, H1A, W18, W22, W5 that were generated and partially sequenced, five corresponded to previously described Bos taurus repetitive DNA E1A, E4A, Ba, W18, W5, one probe W22 shared no homology with other DNA sequences and one H1A displayed a significant homology with Rattus norvegicus mRNA for secretin receptor transmembrane domain 3. Fluorescent in situ hybridisation was performed on metaphase bovine fibroblast cells and showed that five of the seven probes hybridised most centromeres E1A, E4A, Ba, W18, W22, one labelled the arms of all chromosomes W5 and the H1A probe was specific to three chromosomes ch14, ch20, and ch25. Moreover, FISH with H1A resulted in interpretable signals on interphase nuclei in 88% of the cases, while the other probes yielded only dispersed overlapping signals.

Résumé : Génération d-une sonde bovine à séquences répétées pour l-analyse en FISH des noyaux bovins en interphase. L-objectif de cette étude est d-isoler des sondes nucléiques bovines spécifiques d-un faible nombre de chromosomes permettant une analyse par hybridation in situ fluorescente FISH des noyaux en interphase. De telles sondes présentent un outil précieux pour l-étude d-anomalies chromosomiques d-embryons chez les bovins. Sept sondes ont été générées E1A, E4A, Ba, H1A, W18, W22, W5 et partiellement séquencées : cinq d-entre elles correspondent à des séquences répétées d-ADN génomique bovin déjà décrites E1A, E4A, Ba, W18, W5, la sonde W22 ne présente à ce jour aucune homologie avec les séquences connues dans -Genbank- et la dernière, H1A 3,5 kb isolée après digestion par l-enzyme HindIII présente une homologie significative sur 158 paires de base avec l-ARNm codant pour le 3e domaine transmembranaire du récepteur de la secrétine de rat Rattus norvegicus. L-hybridation in situ fluorescente sur des fibroblastes bovins en métaphase a montré que cinq sondes E1A, E4A, Ba, W18, W22 hybrident la plupart des centromères, que la sonde W5 marque les bras de tous les chromosomes, et que la sonde H1A est spécifique de trois chromosomes bovins ch14, ch20 et ch25. De plus, sur noyaux interphasiques, l-utilisation de H1A a permis d-obtenir des signaux interprétables dans 88 % des cas, contrairement aux autres sondes qui donnent des signaux superposés difficiles à interpréter.

keyword : satellite DNA bovine centromere-ADN satellite FISH bovin centromère





Author: Wafa Slimane Daniel Vaiman Sophie Godard Anne Vaiman Edmond Cribiu Jean-Paul Renard

Source: https://hal.archives-ouvertes.fr/



DOWNLOAD PDF




Related documents