en fr structural and functional characterization of the human KIN17 protein étude structurale et fonctionnelle de la protéine KIN17 humaine Report as inadecuate




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1 IBITECS - Institut de Biologie et de Technologies de Saclay

Abstract : Human KIN17 hKIN17 is highly conserved, more abundant in proliferating cellsthan in quiescent cells and overexpressed after UV irradiation and ionizing radiation. All thesesfeatures raised our interest for its structural and functional analysis at the molecular level in orderto describe its functions at the cellular level. Several properties have been described for thehKIN17 protein in different cellular mechanisms such as DNA replication, DNA repair and RNAmetabolism. During my project, I showed by combining data from CD, NMR and SAXS thathKIN17 has a structured domain probably exhibiting a zinc finger fold and a winged helixdomain in its N-terminus region. Only the first domain binds to nucleic acids. The second domainbinds to several RNA helicases involved in transcription and translation. Using X-raycrystallography, I solved the structure of the C-terminal domain which is found only in highereukaryotes and folds into a double SH3-like domain. I showed using different biochemicalmethods molecular filtration, non denaturing IEF that this domain anchors the hKIN17 proteinin a nuclear and acidic complex of high molecular weight, whose components are currentlyidentified by mass spectrometry. Moreover, this domain binds to RNA and modified histones.Taken together, these results confirm the involvement of hKIN17 in RNA metabolism and clarifythe role of each domain within the protein.

Résumé : Très conservée, plus abondante dans les cellules en prolifération que dans les cellulesnormales, stimulée par les rayonnements UV et ionisants, autant de caractéristiques qui ontsuscité notre intérêt pour l-analyse structurale et fonctionnelle de la protéine KIN17 humainehKIN17 dans le but de caractériser sa ou ses fonctions dans la cellule. Plusieurs propriétés ontété décrites pour la protéine hKIN17 dans différents mécanismes cellulaires tels que la réplicationde l-ADN, la réparation de l-ADN et le métabolisme de l-ARN. Pendant ma thèse, j-ai montré encombinant des données de DC, RMN et SAXS que la protéine hKIN17 possède un domainestructuré adoptant probablement le repliement d-un doigt de zinc et un domaine winged helixdans sa région N-terminale. Seul le premier domaine lie les acides nucléiques, le deuxièmedomaine ayant pour partenaires plusieurs hélicases à ARN impliquées dans la transcription et latraduction. J-ai résolu par cristallographie aux rayons X la structure du domaine C-terminal quiest retrouvé uniquement chez les eucaryotes supérieurs et se replie en un double domaine de typeSH3. J-ai montré par différentes méthodes biochimiques filtration sur gel, gel IEF natif que cedomaine ancre la protéine hKIN17 à un complexe nucléaire acide de haut poids moléculaire dontles composants sont en cours d-identification par spectrométrie de masse. De plus, il lie l-ARN etles histones modifiées. L-ensemble de ces résultats confirment l-implication de la protéinehKIN17 dans le métabolisme de l-ARN et précisent le rôle de chacun des domaines au sein de laprotéine.

en fr

Keywords : structural biology isolation of interacting proteins X-ray crystallography nuclear magnetic resonance small angle X-ray scattering RNA protein complexes.

Mots-clés : complexes protéiques KIN17 biologie structurale recherche de partenaires protéiques cristallographieaux rayons X résonance magnétique nucléaire diffusion des rayons X aux petits angles ARN complexes protéiques.





Author: Albane Le Maire -

Source: https://hal.archives-ouvertes.fr/



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